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    3. 阿拉丁細胞裂解液選型與配制

      來源: 上海阿拉丁生化科技股份有限公司   2020-12-14   訪問量:910評論(0)


      阿拉丁細胞裂解液選型與配制

      細胞裂解液是以去污劑為基礎、針對細胞裂解應用、成分優化的緩沖液和試劑。對于不同細胞類型、蛋白定位、以及下游應用,需要不同的細胞裂解液進行有效的細胞裂解和蛋白提取。

      去污劑主要類型及其作用

      根據去污劑類型、蛋白定位、及目的蛋白性質來確定細胞裂解液的種類。

      去污劑主要類型及其作用

      類型帶電情況作用應用舉例
      離子型
      (變性去污劑)
      帶電荷的
      陰離子性或陽離子性的
      破壞蛋白活性、功能及蛋白間相互作用力總蛋白提取
      SDS-PAGE
      SDS
      ETMAB
      非離子型
      (非變性去污劑)
      不帶電荷較少破壞活性及功能,可維持蛋白間作用力酶學檢測
      免疫檢測
      Triton X-100
      Tween 20
      NP-40
      兩性離子型具有正電荷和負電荷的基團
      但凈電荷為零
      兼具離子型和非離子型去污劑的特點,能破壞蛋白質間相互作用 CHAPS
      CHAPSO

      根據蛋白定位不同推薦的裂解液種類

      蛋白定位
      全細胞
      細胞質
      (可溶性蛋白)
      細胞質
      (細胞骨架等不溶性蛋白)
      細胞膜
      細胞核
      線粒體
      裂解液種類
      NP-40或RIPA
      Tris-HCl
      Tris-Triton
      NP-40或RIPA
      RIPA
      RIPA

      常用細胞裂解液

      #RIPA緩沖液

      最初以其開發的測定方法(放射免疫沉淀測定法)來命名,是兩種離子去污劑和一種非離子去污劑的Tris緩沖液,也是哺乳動物細胞或軟組織裂解和蛋白提取的常用選擇。

      常用配方:

      25 mM Tris-HCl, pH 7.6

      150 mM NaCl

      1% NP-40

      1%去氧膽酸鈉

      0.1%十二烷基硫酸鈉(SDS)

      兼容應用:

      BCA及去污劑兼容型的Bradford試劑蛋白濃度測定、SDS-PAGE、蛋白質免疫印跡、ELISA及純化等。

      #IP緩沖液

      是一種修飾型的RIPA緩沖液(不含SDS),可有效溶解細胞蛋白,但無法釋放基因組DNA或破壞蛋白復合物,可兼容下游的免疫沉淀或者親和吸附的應用。

      常用配方:

      25 mM Tris-HCl, pH 7.4

      150 mM NaCl

      1% NP-40

      1% mM EDTA

      5% 甘油

      兼容應用:

      BCA及去污劑兼容型Bradford試劑蛋白濃度測定、蛋白質免疫印跡、ELISA、免疫沉淀及報告基因檢測。

      #NP-40緩沖液

      NP-40是一種非離子型聚氧乙烯表面活性劑,常作為細胞裂解緩沖液或其他用于提取和溶解蛋白質的溶液的組分。

      常用配方:

      150mM NaCl

      1.0% NP-40

      50mM Tris-HCl,pH值8.0

      兼容應用:

      BCA及去污劑兼容型Bradford試劑蛋白濃度測定、蛋白質免疫印跡、ELISA、免疫沉淀。

      #Tris-Triton緩沖液

      非離子型表面活性劑,常用作細胞裂解緩沖液或其他用于提取和溶解蛋白質的溶液。Trition X-100效果介于NP-40和SDS之間。

      常用配方:

      10mM 三羥甲基氨基甲烷(Tris),pH值7.4

      100mM NaCl

      1mM EDTA

      1mM EGTA

      1% Triton X-100

      10% 甘油

      0.1% SDS

      0.5% 去氧膽酸鈉

      兼容應用:

      BCA及去污劑兼容型Bradford試劑蛋白濃度測定、蛋白質免疫印跡、ELISA、免疫沉淀。

      產品列表

      產品號產品名稱規格Cas包裝
      C111538 氯化鈉用于細胞和昆蟲細胞培養,≥99.5%(T)7647-14-5500g,2.5kg
      N105507NP-40~10% in H2O9016-45-9 25ml,100ml,
      500ml,5L
      T109026 Triton X-100生化試劑級9002-93-1100ml,500ml,1L,4L
      T105291三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽(Tris HCl)用于分子生物學和細胞培養,≥99.0%(AT)1185-53-1100g,500g
      S104198脫氧膽酸鈉98%302-95-425g,100g,
      250g,500g
      S118591十二烷基硫酸鈉(SDS)分子生物學級,≥98.5% (GC)151-21-3 25g,100g,
      500g
      T110602三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)細胞培養級,≥99.9%(T)77-86-15kg
      E112489乙二胺四乙酸(EDTA)99%,用于細胞培養60-00-4100g,500g
      E1044343,6-二氧雜-1,8-辛二胺四乙酸(EGTA)用于分子生物學,≥99.0%67-42-5 25g,100g,
      500g
      G118851甘油無菌,for molecular biology, ≥99%56-81-5100ml



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